ZASTOSOWANIE RT-PCR W CZASIE RZECZYWISTYM

Wirus pryszczycy (FMDV) jest diagnozowany za pomoc- testu izolacji wirusa w po--czeniu z testem ELISA antygenu, a ostatnio jednoetapowym RT-PCR. Zastosowanie fluorogenicznego RT-PCR zyskuje coraz wi-ksze znaczenie w szybkim wykrywaniu FMDV z próbek klinicznych, które nie mog- by- przetwarzane za pomoc- zwyk-ych testów izolacji wirusa i antygenu ELISA. Ilo-ciowy RT-PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR) --czy odwrotn- transkrypcj- z amplifikacj- PCR i wykrywaniem pozytywnej amplifikacji przy u-yciu sond fluorescencyjnych, takich jak sonda TaqMan ®. W niniejszym badaniu, qRT-PCR oparty na sondzie TaqMan® zostä ustandaryzowany i wykorzystany do wykrywania genomu FMDV z próbek klinicznych, w tym wydzielin nosowych, osocza i p-ynów ustno-gard-owych (próbki probang). Wst-pn- standaryzacj- przeprowadzono przy u-yciu ró-nych seryjnych rozcie-cze- izolatu FMDV OTNN 24/84 (106,8 TCID50), a 102 wirusy mo-na by-o zidentyfikowä za pomoc- TaqMan® qRT-PCR. Standardy RNA zostäy zsyntetyzowane in vitro z plazmidu zawieraj-cego 110 par zasad regionu 3D izolatu FMDV typu O. Dziesi-ciokrotne seryjne rozcie-czenie RNA zostäo wykonane i u-yte jako standardowy RNA do wygenerowania krzywych wzorcowych.

Dr N. Vijayalakhsmi jest adiunktem i kierownikiem Katedry Technologii -ywnöci w JNTUA College of Engineering Kalikiri.